Video-Tutorials
Durchstöbern Sie unsere Bibliothek mit How-to-Videos für umfassende Schritt-für-Schritt-Demonstrationen von Reinigungsverfahren und Anwendungstipps für Produkte, gefilmt von unserem Wissenschaftlerteam.
Proteinreinigung mittels Affinitätschromatographie - Vollständiges Tutorial
Reinigung mit vorgepackter Säule
Diese schrittweise Anleitung demonstriert das vollständige Reinigungsverfahren eines Zielproteins, hier mCherry-Twin-Strep-tag, über eine Gravity-Flow-Säule, einschließlich der anfänglichen Puffer- und Säulenvorbereitungsschritte sowie der Regeneration der Säule nach der Reinigung und ihrer Vorbereitung zur Lagerung bis zur weiteren Verwendung. Die in diesem Tutorial verwendete Gravity-Flow-Säule enthält Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity Resin.
Packen Sie Ihre eigene Säule
Das Proteinreinigungsresin im Bulk-Format ist für die Säulen-Affinitätschromatographie und nicht für die Batch-Reinigung optimiert und ist daher für das Packen Ihrer eigenen Gravity-Flow-Säulen vorgesehen.
Dieses Video-Tutorial demonstriert das Packen der 1-ml-Gravity-Flow-Säule am Beispiel des Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity Resins.
Proteinreinigung mit großen Probenvolumina
WET FRED ist eine Applikationshilfe für die Reinigung von (Twin-)Strep-tag® Fusionsproteinen über Gravity-Flow-Säulen, die Strep-Tactin® oder Strep-Tactin®XT Resins enthalten. Sie arbeitet nach dem Siphon-Prinzip und wird verwendet, um große Volumina von Zellkulturüberständen oder Lysaten in die Gravity-Flow-Säulen zu applizieren. Die Säulen können nicht trocken laufen, können über Nacht stehen bleiben und müssen nicht beaufsichtigt werden. Außerdem ist keine komplizierte Software erforderlich, die die Einrichtung und Verwendung erleichtert.
Die nachstehenden Video-Tutorials veranschaulichen den Aufbau und die Verwendung des WET-FRED-Systems sowie die Reinigung des WET FRED, die nach der Verwendung und vor der nächsten Reinigungsrunde durchgeführt werden muss.
Proteinreinigung mittels magnetischer Beads
Neben der 50%igen Suspension gibt es die Strep-tag®-Produkte für die Proteinreinigung in einer Vielzahl anderer Formate, die verschiedene Anwendungen ermöglichen.
Magnetische Beads sind ein vielseitiges Tool, das sich für viele Anwendungen eignet, z. B. für die Batch-Reinigung vieler Proben parallel, Pull-downs, Immunpräzipitation oder Co-Immunpräzipitation.
Diese Schritt-für-Schritt-Anleitung demonstriert das vollständige Reinigungsverfahren eines Zielproteins, hier mCherry-Twin-Strep-tag, mit Hilfe von magnetischen Beads (MagStrep Strep-Tactin®XT-Beads).
Proteinreinigung mit Spin-Säulen
Für Experimente in kleinem Maßstab mit einer begrenzten Anzahl von Proben sind Spin Columns ein praktisches Tool. Sie eignen sich perfekt für die schnelle und effiziente manuelle Reinigung einer Reihe von verschiedenen Proteinen zur gleichen Zeit.
Dieses Video-Tutorial demonstriert Schritt für Schritt das vollständige Reinigungsverfahren von Zielproteinen unter Verwendung des Strep-Tactin®XT 4Flow® High Capacity Spin Column Kit, Reaktionsgefäßen, Vortex und Zentrifuge.
Regenerierung und Wiederverwendung von Resins
Strep-Tactin®- und Strep-Tactin®XT-Resins für die Proteinreinigung können ohne Kapazitätsverlust >10 Mal* regeneriert und wiederverwendet werden. Die Aktivität des Resins lässt sich leicht mit HABA überprüfen. Die gelbe HABA-Lösung färbt sich nach der Bindung an die Biotin-Bindetaschen von Strep-Tactin® und Strep-Tactin®XT rot (Strep-Tactin®) bzw. orange (Strep-Tactin®XT), was eindeutig anzeigt, dass das Resin vollständig regeneriert ist. Anschließend kann HABA durch Waschen mit 100 mM NaOH entfernt werden. Sobald die rote Farbe verschwunden ist und zusätzlich mit Buffer W gewaschen wurde um NaOH zu entfernen, kann die Säule wiederverwendet werden. Wenn die Biotin-Bindetasche blockiert oder beschädigt ist, tritt keine Farbverschiebung auf und das Resin kann nicht wiederverwendet werden.
*unter idealen Bedingungen können >50 Regenerationszyklen durchgeführt werden
Die Videos unten zeigen die jeweiligen Farbverschiebungen für verschiedene Resins.
Isolierung von Zellen
Zellen, die Strep-getaggte Oberflächenproteine exprimieren, können über diese Affinitäts-Tags durch verschiedene Methoden wie Durchflusszytometrie, magnetischer Trennung oder Affinitätschromatographie, selektiert werden. Alternativ können Strep-getaggte Proteine, die an Zellen binden, mit verschiedenen Strep-Tactin® und Strep-Tactin®XT Konjugaten kombiniert werden. Dadurch werden Selektionsreagenzien gebildet, mit denen spezifische Zellpopulationen isoliert werden können.
Die folgenden Video-Tutorials zeigen alle Schritte der Zellisolierung aus verschiedenen Proben mittels Affinitätschromatographie mit Strep-Tactin® TACS-Agarosesäulen und magnetischer Zellisolierung unter Verwendung von Strep-Tactin® Magnetic Microbeads, beides in Kombination mit einem Strep-getaggten Fab Fragment.
