Strep-Tactin® 4Flow® high capacity - Neues Agarose Resin
Strep-Tactin® 4Flow® high capacity ersetzt:
- Strep-Tactin® Sepharose®
- Strep-Tactin® Superflow®
- Strep-Tactin® Superflow® high capacity
und vereinheitlich dabei die Resins bei gleichbleibender Performance.
Strep-Tactin® 4Flow® high capacity besteht aus einer niedrig konzentrierten (4%) und druckstabilen Agarose in Verbindung mit einer hohen Strep-Tactin®-Dichte. Diese Spezifikationen führen zu
- hoher Bindekapazität für Proteine
- Eignung für FPLC-Anwendungen
- hohe Ausbeuten für alle Proteinklassen und insbesondere große Proteine
mit den üblichen hohen Zielproteinreinheiten. Darüber hinaus zeichnet sich dieses neue Resin durch eine hervorragende Stabilität aus, die mindestens 50 Regenerationszyklen ermöglicht.
Was ist der Unterschied zwischen Sepharose®, Superflow® und 4Flow®?
Die Grundmatrix vieler Resins für die Proteinreinigung sind poröse Agarosebeads. Die Eigenschaften dieser Agarosebeads bestimmen, für welche Proteine und für welche Anwendungen das Resin am besten geeignet ist. Das Sepharose® Resin von IBA besteht aus einer 4%igen vernetzten Agarose und ist daher nicht nur für kleine, sondern auch für große Proteine geeignet. Ein Nachteil von Sepharose® ist jedoch, dass es nicht druckstabil ist und sich daher nicht für automatisierte Anwendungen wie FPLC eignet. Im Gegensatz dazu eignen sich die Superflow®-Produkte von IBA gut für FPLC. Der Nachteil von Superflow® ist, dass es aus 6%igen vernetzten Agarose besteht. Dies bedeutet, dass die Poren kleiner und für größere Proteine nicht zugänglich sind, was zu geringen Ausbeuten führt.
4Flow® kombiniert die vorteilhaften Eigenschaften von Sepharose® und Superflow®. Es handelt sich um eine 4%ige vernetzte Agarose, die druckstabil ist, was sie zu einer universellen Matrix für kleine und große Proteine sowie für verschiedene Anwendungen wie FPLC macht.
| Matrix | Strep-Tactin® Superflow® | Strep-Tactin® Sepharose® | Strep-Tactin® 4Flow® |
|
Bead-Struktur | 6% Agarose, vernetzt | 4% Agarose, vernetzt | 4% Agarose, hoch vernetzt |
| Bead-Größe | 60-160 μm, kugelförmig | 45-165 μm | 50-150 μm, kugelförmig |
| Ausschlussgrenze | 6 x106 Da | ~3 x107 Da | 3 x107 Da |
| Empfohlene Flussrate | 1 ml FPLC-Säule: 0,5-1 ml/min 5 ml FPLC-Säule: 1-3 ml/min | Gravity-flow |
1 ml FPLC-Säule: 0,5-1 ml/min 5 ml FPLC-Säule: 1-3 ml/min |
| pH-Bereich für Proteinbindung | 7-8 | 7-8 | 7-8 |
| Maximaler Druck | 9,6 bar | Gravity-flow | 3,5 bar |
| Eluierungsmittel | Desthiobiotin | Desthiobiotin | Desthiobiotin |
| Regenerationspuffer | Buffer R | Buffer R | 100 mM NaOH |
Erhöhte Bindekapazität
Die höhere Dichte der auf Strep-Tactin® 4Flow® high capacity immobilisierten Strep-Tactin®-Moleküle führt zu einer insgesamt höheren Bindekapazität im Vergleich zu Strep-Tactin® Sepharose® und Strep-Tactin® Superflow® high capacity. Während Strep-Tactin® Superflow® aufgrund seiner 6%igen Agarosematrix eine geringe Bindekapazität für große Proteine aufweisen kann, bietet Strep-Tactin® 4Flow® high capacity eine gleichbleibend hohe Bindekapazität für alle Proteine, unabhängig von ihrer Größe.
Abb.1 : Ausbeute an Zielproteinen nach der Reinigung mit Strep-Tactin® Resins
Die höhere Dichte der auf Strep-Tactin® 4Flow® high capacity immobilisierten Strep-Tactin®-Moleküle führt zu einer insgesamt höheren Bindekapazität im Vergleich zu Strep-Tactin® Sepharose® und Strep-Tactin® Superflow® high capacity. Während Strep-Tactin® Superflow® aufgrund seiner 6%igen Agarosematrix eine geringere Bindekapazität für große Proteine aufweisen kann, bietet Strep-Tactin® 4Flow® high capacity eine gleichbleibend hohe Bindekapazität für alle Proteine, unabhängig von deren Größe.
Ausgezeichnete Reinheit
Aufgrund der spezifischen Bindung von Strep-Tactin® an Strep-tag®II oder Twin-Strep-tag® wird eine hohe Zielproteinreinheit erreicht. Da die Strep-Tactin®-Moleküle, die an das neue 4Flow® Resin gekoppelt sind, die gleichen sind wie die, die für Sepharose® und Superflow® verwendet werden, bleibt die hervorragende Reinheit jedes gereinigten Proteins identisch.
Abb. 2: Hohe Reinheit des Zielproteins mit Strep-Tactin® 4Flow® high capacity. Um die Reinheit des neuen Strep-Tactin® 4Flow® high capacity Resins zu bewerten, wurde ein mit einem Twin-Strep-tag® fusioniertes GFP-Protein mit E. coli-Lysat vermischt und anschließend mit FPLC-Säulen gereinigt. Es wurde eine Reinheit von 98 % erreicht.
Hervorragende Stabilität und Regeneration mit NaOH
Abb. 3: Die Proteinreinigung mit Strep-Tactin® 4Flow® high capacity wird mit unseren üblichen Wasch- (Buffer W) und Elutionspuffern (Buffer E) für Strep-Tactin® Resins durchgeführt. Die einzige Protokollanpassung ist unsere Empfehlung für die Regeneration: Diese sollte mit 0,1 M NaOH durchgeführt werden. Unser HABA-haltiger Buffer R kann jedoch nach wie vor für Funktionalitätstests verwendet werden.
Abb. 4: Strep-Tactin® 4Flow® high capacity wurde mit 0,1 M NaOH regeneriert (1 ml FPLC-Säulen). Die Proteinbindekapazität eines mit einem Twin-Strep-tag® fusionierten Nanobodies blieb über mindestens 50 Zyklen stabil.
