Hochdurchsatz-Aufreinigung
Bevor ein bestimmtes Zielprotein ausgewählt und im Detail untersucht werden kann, muss eine große Anzahl von Proteinen in Hochdurchsatz-Screenings (HTS) untersucht werden. Um sich auf ihre Funktion ohne die Einflüsse der anderen im Organismus vorhandenen Moleküle zu konzentrieren, müssen diese Proteine gereinigt werden. Viele Hochdurchsatz-Reinigungsanwendungen erfordern teure Geräte und spezifisches technisches Wissen. Alternativ dazu können bekannte und bereits etablierte Methoden so skaliert werden, dass sie in Laboren jeder Größe durchgeführt werden können.
| Ansatz für die Anwendung | Empfohlenes Produkt |
Bindekapazität |
Erforderliche Ausrüstung |
|---|---|---|---|
Manuell |
Zentrifugensäulen |
Bis zu 600 µg Protein pro Säule | Mikropipetten, Zentrifuge, Schüttler |
Halbautomatisch |
Magnetische Beads in 96-Well-Platte | Ab 500 µg pro Well | Magnetseparator, Mikropipetten, Mehrkanalpipetten oder Pipettierroboter, Mikroplattenschüttler |
Automatisiert |
IMCStips® | Bis zu 50 µg pro Spitze | Pipettier-Roboter |
Manuelle Anwendungen
Für Experimente in kleinem Maßstab mit einer begrenzten Anzahl von Proben können Zentrifugensäulen verwendet werden. Sie sind ein praktisches Werkzeug für kleine Probenmengen, die noch manuell gehandhabt werden können. Dabei ist die Anzahl der Proteine, die gleichzeitig schnell und effizient aufgereinigt werden können, flexibel. Ein Spin Column Kit mit allen notwendigen Komponenten für die Proteinaufreinigung sowie leere Zentrifugensäulen, die mit dem Resin der Wahl kombiniert werden können, sind bei IBA Lifesciences erhältlich.
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Halbautomatische Anwendungen
Magnetische Beads, wie z. B. MagStrep® Strep-Tactin®XT-Beads, können in einer 96-Well-Platte mit rundem Boden verwendet werden, was die gleichzeitige Aufreinigung von bis zu 96 Proben ermöglicht. In diesem Format kann die Anwendung immer noch manuell durchgeführt werden, aber auch der Einsatz von Pipettierrobotern ist möglich. Der magnetische Kern der Beads ermöglicht die Verwendung eines Magneten, um die Beads beim Entfernen des Überstands in den Vertiefungen zu fixieren, wodurch der Verlust von Beads verringert wird und eine Zentrifugation überflüssig ist.
Automatisierte Anwendungen
Für einen automatisierten Ansatz, der nur minimale manuelle Eingriffe erfordert, sind IMCStips® mit Strep-Tactin®XT-Resin erhältlich. Das Spitzenformat ermöglicht eine Affinitätsreinigung mit hohem Durchsatz und gleichbleibender Reproduzierbarkeit, was es für industrielle Anwender besonders attraktiv macht. Der Ansatz wird in der folgenden Application Note ausführlich beschrieben. Mehr über die automatisierte Aufreinigung von Proteinen mit IMCStips® erfahren Sie auf der IMCS-Website.
Arbeitsablauf bei der Proteinaufreinigung mit IMCStips®, die Strep-Tactin®XT-Harz enthalten
Analytische Hochdurchsatz-Screening-Anwendungen
Die identifizierten und gereinigten Proteine aus dem ersten Screening können anschließend mit Hilfe der Strep-tag®-Technologie weiter charakterisiert werden. Aufgrund der herausragend hohen Affinität des Twin-Strep-tag® zu Strep-Tactin®XT (pM-Bereich) ist Strep-Tactin®XT sehr gut für biomolekulare Interaktionsanalyse-Technologien wie Oberflächenplasmonenresonanz (SPR) oder Biolayer-Interferometrie (BLI) geeignet.
